产品增强的逆转录酶用于评估在载体中具有复制能力的病毒,这些载体是具有GALV和VSV-G包裹伪型的逆病毒载体
Kenneth Cornetta1, Tsai-Yu Lin1, Haipeng Tao2
1Department of Medical and Molecular Genetics, Indiana University School of Medicine, USA.
Journal of virological methods
|June 22, 2024
概括
产品增强逆转录酶 (PERT) 试验有效地检测复制能力强的逆转录病毒在逆转录病毒载体产品中. 短时间培养的无细胞介质可以区分无病毒产品和含有病毒的产品.
科学领域:
- 病毒学 病毒学
- 分子生物学分子生物学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 复原病毒载体是基因治疗和生物研究中的关键工具.
- 在载体产品中精确检测复制能力强的逆转录病毒 (RCR) 对于安全至关重要.
- 现有的检测方法,如S+/L-试验在标准化方面存在局限性.
研究的目的:
- 评估产品增强逆转录酶 (PERT) 试验,用于检测复原病毒载体产品中的RCRs.
- 将PERT试验的性能与传统的S+/L-试验进行比较.
- 评估PERT适用于与吉本猿白血病病毒 (GALV) 和膀性口炎病毒G (VSVG) 包裹伪型的载体的适用性.
主要方法:
- 复原病毒载体产品在HEK293细胞上培养了三个星期,以放大潜在的病毒.
- 载体超和生产结束时的细胞被GALV添加,以测试抑制.
- 使用PERT测试和S+/L-测试检测病毒,并比较结果.
主要成果:
- 无论是PERT和S+/L-测试都成功检测到了病毒.
- 经过三周的培养,载体超标仍然对PERT病毒呈阴性.
- 用PERT测试的生产终端细胞呈阳性,表明持续的载体生产.
- 一周培养的无细胞介质能够区分无病毒和含病毒的试验物.
结论:
- PERT测定是一种适合和标准化的方法,用于检测GALV和VSVG伪型复原病毒载体产品中的RCR.
- 持久的载体产生细胞可能是直接PERT测定中错误阳性的来源.
- 短时间培养无细胞介质是用于精确检测载体产品中RCR的有价值的修改.
