一个极其敏感的超高吞吐量增长选择试验,用于识别阿米达斯活性

科学领域:

• 生物催化和酶工程 生物催化和酶工程
• 合成化学 合成化学
• 分子生物学分子生物学

背景情况:

• 氨基酶是合成奇拉胺的关键生物催化剂,在药品和精细化学品中是必不可少的.
• 现有的阿米达斯识别和表征方法缺乏吞吐量和灵敏度.
• 需要高效的工具来扩大可用的阿米达斯类药物库.

研究的目的:

• 引入一种超高吞吐量增长选择试验,用于识别胺酶活性.
• 开发一种用于选酶变异的敏感方法,特别是用于增强胺酶功能.
• 为各种表达系统和项目需求提供灵活的测试.

主要方法:

• 开发一种使用叶酸前体p-aminobenzoic acid (PABA) 的生长选择试验.
• 模仿染色基质与PABA衍生的胺,以检测胺酶活性.
• 使用亚纳米级PABA度以获得高测定灵敏度.
• 使用不同的表达系统和抗代谢物硫法醇调整试验灵敏度.

主要成果:

• 该试验可以在两天内在单个阿加板上选数千万种酶变体.
• 选择与叶酸生物合成相结合,比基于碳或源的测试具有更高的灵敏度.
• 该试验证明了对胺酶识别和工程的广泛适用性.

结论:

• 基于PABA的测定提供了一个超高吞吐量,灵敏,灵活的工具,用于化酶的发现和工程.
• 这种方法显著加快了用于生物催化物的新型氨基酶的识别.
• 该试验非常适合针对增强的氨基酶活动的酶工程活动.