开发SYK纳米BRET细胞目标参与测试的功能增益变体的SYK纳米BRET细胞目标参与测试
Jacob L Capener1, James D Vasta2, Vittorio L Katis3
1Structural Genomics Consortium, Division of Chemical Biology and Medicinal Chemistry, Eshelman School of Pharmacy, The University of North Carolina at Chapel Hill, Chapel Hill, NC 27599, USA.
bioRxiv : the preprint server for biology
|June 25, 2024
概括
腺氨酸激酶 (SYK) 的功能增益变体导致免疫失调. 使用MRL-SYKi的新NanoBRET试验有效测量SYK变体活性和活细胞中的抑制剂结合.
科学领域:
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 生物化学 生物化学
- 细胞生物学 细胞生物学
背景情况:
- 腺氨酸激酶 (SYK) 是一个关键的信号蛋白,在各种免疫受体下游被激活.
- 功能获取 (GoF) SYK变体导致免疫失调,炎症和淋巴瘤倾向.
- 目前研究SYK变异的现有方法在活细胞测试中是有限的.
研究的目的:
- 为SYK GoF变体开发一个NanoBRET细胞向参与试验.
- 为了描述SYK GoF变异的活性,使用一种新的SYK向标记器,MRL-SYKi.
- 评估ATP竞争性SYK抑制剂在完整细胞中对SYK GoF变体的强度.
主要方法:
- 使用SYK GoF变体开发SYK NanoBRET细胞向参与试验.
- 使用SYK捐赠的化学探针MRL-SYKi作为标记器.
- 测试的SYK变体 (SYK ((S550Y),SYK ((S550F),SYK ((P342T)) 和它们对活细胞中的抑制剂的反应,包括表达SYK ((S550Y) 的SW480细胞.
主要成果:
- 纳米BRET试验成功地在活细胞中激活了SYK GoF变体.
- MRL-SYKi证明了与具有SYK变异的ATP竞争性SYK抑制剂的强有力的结合.
- MRL-SYKi有效降低了SYK变体的催化活性和SYK (S550Y) 酸化水平.
结论:
- 一种新的NanoBRET试验使得在完整的细胞中研究SYK GoF变体成为可能.
- MRL-SYKi是评估SYK变体活性和抑制剂有效性的宝贵工具.
- 这种测试平台有助于为SYK驱动的免疫疾病开发有针对性的疗法.
