在CHO DG44细胞中稳定产生具有高强度的绑定重组鱼黄激素类似物
Munkhzaya Byambaragchaa1, Sei Hyen Park2, Sang-Gwon Kim2
1Carbon-Neutral Resources Research Center, Hankyong National University, Anseong 17579, Republic of Korea.
Current issues in molecular biology
|June 26, 2024
概括
一种新型的重组鱼质化激素 (rec-eel LH) 模拟物被开发用于增强功效. 这种工程激素在CHO DG44细胞中产生,具有卓越的生物活性和大规模生产潜力.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 内分泌学 在内分泌学.
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 再组合蛋白质的生产对于治疗应用至关重要.
- 开发素激素 (LH) 的强效类似物是生殖技术的关键.
- 中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞是大规模重组蛋白制造的首选系统.
研究的目的:
- 为了产生一种高效的重组鱼质化激素 (rec-eel LH) 模拟物.
- 描述新型LH突变的特性和生物活性.
- 建立一个稳定的细胞系统,用于大规模生产增强型鱼LH.
主要方法:
- 连接鱼LH-wt和LH-M等离子体的构建和转化为CHO DG44细胞.
- 单克隆细胞系的隔离和选择用于重组蛋白表达.
- 分泌蛋白质水平的量化,分子重量分析和N链接糖化评估.
- 试验室生物活性测定测量EC50和最大响应度,包括pERK1/2激活.
主要成果:
- 建立了表达鱼LH-wt和LH-M的稳定CHO DG44细胞系.
- 在第9天达到5000-7500 ng/mL的高分泌水平.
- 鱼LH-M突变体显示分子量增加和显著增强的生物活性 (2.90倍更高的EC50).
- 证实了翻译后的修改,包括O相关的糖化,并观察到强烈的cAMP反应.
结论:
- 在一个稳定的CHO DG44细胞系统中成功生产了一种新型的,高强度的绑定回收LH模拟物 (LH-M).
- 与野生类型相比,工程LH-M在体外表现出优越的生物活性.
- 这种系统可以大规模生产一种先进的鱼LH模拟物,具有潜在的治疗应用.
