在CHO细胞中PEI介导的短暂基因表达

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 细胞生物学 细胞生物学
• 分子生物学分子生物学

背景情况:

• 过渡性转染对于哺乳动物细胞中重组蛋白质的产生至关重要.
• 优化传输效率和可扩展性仍然是工业应用的关键挑战.
• 中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞被广泛用于生物制药制造.

研究的目的:

• 开发和描述一种强大的,可扩展的方法,用于悬浮适应的CHO-DG44细胞的聚乙烯胺 (PEI) 介导的短暂转化.
• 为了优化高水平蛋白质表达的条件,在广泛的体积范围内 (2毫升至2升).
• 为成功的基因传递和蛋白质生产提供详细的协议.

主要方法:

• 通过直接添加等离子体DNA (pDNA) 和PEI,在高密度 (5 × 10^6细胞/毫升) 的CHO-DG44细胞中进行转染.
• 在31°C进行化,并进行轨道震动,以实现最佳的转染和蛋白质生产.
• 使用编码pDNA,填充DNA和PEI的特定度,可选添加N,N-二甲基胺 (DMA).

主要成果:

• 成功展示了一种可扩展的转染方法,可从小规模 (2毫升) 到大规模 (2升) 培养.
• 确定了最佳试剂度:编码pDNA的0.3 mg/L,填充剂DNA的2.7 mg/L和PEI的15 mg/L.
• 展示了一种修改后的协议,通过调整编码DNA水平来消除DMA,从而在生产中提供灵活性.

结论:

• 描述的PEI介导的转染方法为CHO-DG44细胞中的蛋白质表达提供了一种可靠和可扩展的方法.
• 该协议可适应各种培养量,方便工艺开发和制造.
• 这种方法为生物制药研究和工业中高效的重组蛋白质生产提供了有价值的工具.