在Helsmoortel-Van der Aa综合征患者中追踪不可见的突变ADNP蛋白
Claudio Peter D'Incal1, Elisa Cappuyns2, Kaoutar Choukri2
1Cognitive Genetics (COGNET) and Protein Chemistry, Proteomics and Epigenetic Signaling (PPES), Department of Biomedical Sciences, University of Antwerp, Antwerp, Belgium. claudio.dincal@uantwerpen.be.
Scientific reports
|June 26, 2024
概括
对活动依赖性神经保护性荷梅博克斯 (ADNP) 蛋白质的抗体验证对于赫尔斯穆尔特尔-范德尔阿综合征 (HVDAS) 研究至关重要. 这项研究开发了可靠的检测ADNP蛋白的方法,揭示了在患者样本中识别突变形式的挑战.
科学领域:
- 神经科学是一个神经科学.
- 遗传学 遗传学是一种遗传学.
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 赫尔斯穆尔特尔-范德尔阿综合征 (HVDAS) 是由活动依赖神经保护本体盒 (ADNP) 基因的新突变引起的.
- 之前的研究发现了突变的ADNPmRNA,但蛋白质水平的研究受到不可靠的抗体的阻碍.
- 对ADNP蛋白的最佳检测对于了解HVDAS病原体至关重要.
研究的目的:
- 验证抗体以准确检测野生型和突变ADNP蛋白质.
- 在各种生物样本中研究ADNP蛋白的表达和检测能力.
- 提高对HVDAS中突变ADNP蛋白分析的批判性评估的认识.
主要方法:
- 使用阻断竞争试验和西部抹杀的抗体验证.
- 在CRISPR/Cas9中介的Adnp淘汰细胞系中进行免疫封闭.
- 使用表位标签 (GFPSpark,Flag-tag) 在大肠杆菌系统中表达和检测野生类型和突变ADNP.
- 用N端和C端ADNP抗体进行免疫沉测定.
主要成果:
- 一个经过验证的N端ADNP抗体检测到了150kDa左右的特定波段,高于理论分子量.
- C终端抗体证实了150kDa的ADNP信号.
- 淘汰细胞系显示了150kDa频段的消失,证实了抗体的特异性.
- 在表达系统中检测到带标记的野生类型和突变ADNP.
- 内源性ADNP在异构细胞系中可视化,但截断的突变需要表位标签.
- 原生突变ADNP蛋白在患者衍生的hiPSC,淋巴细胞类细胞系或大脑物质中没有被检测到.
- 免疫沉在过度表达溶解体中丰富了截断突变,但在患者衍生的细胞系中失败了.
结论:
- 开发并验证了用于检测ADNP蛋白的可靠抗体.
- 在患者获得的样本中检测原生突变ADNP蛋白仍然具有挑战性.
- 皮质标记可能有助于检测和稳定截断的ADNP突变.
- 在HVDAS研究中对突变ADNP蛋白质分析需要进行批判性评估和意识.
