生物化人类ACE2和SARS-CoV-2Omicron BA.4/5尖端蛋白参考材料的表征
Bradley B Stocks1, Marie-Pier Thibeault2, Denis L'Abbé3
1Metrology, National Research Council Canada, 1200 Montreal Road, Ottawa, ON, K1A 0R6, Canada. bradley.stocks@nrc-cnrc.gc.ca.
Analytical and bioanalytical chemistry
|June 28, 2024
概括
加拿大国家研究委员会为SARS-CoV-2血清学试验开发了两种蛋白质参考材料. 这些试剂,ACE2-1和OMIC-1,在尖端蛋白突变和IP问题中帮助标准化.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 材料科学 材料科学 材料科学
背景情况:
- 准确的COVID-19血清学检测对流行病管理至关重要.
- 尖端蛋白突变和知识产权问题阻碍了测试套件的可比性.
- 标准化需要具有良好的特征,常见的试剂.
研究的目的:
- 为SARS-CoV-2血清学开发和描述蛋白质参考材料.
- 为可靠的测试开发和验证提供标准化试剂.
- 为了解决在COVID-19管理中对可比的诊断工具的需求.
主要方法:
- 生产生物化人类 ангиотензин转化酶2 (ACE2-1) 和SARS-CoV-2 Omicron BA.4/5尖端蛋白 (OMIC-1) 的参考材料.
- 使用同位素稀释液体染色学,双重质谱学和UV-Vis光谱学量化蛋白质度.
- 通过UV-Vis,尺寸排除液体色谱 (LC-SEC) 和多角度光散射来评估均性,稳定性和寡合状态.
- 通过表面等离子体共振 (SPR) 评估蛋白质功能,以确定结合亲和力.
主要成果:
- 确定ACE2-1蛋白度为25.3±1.7μmol L−1 (98%的单体).
- OMIC-1蛋白度确定为5.4±0.5μmol L−1 (82%的三元体).
- SPR分析证实OMIC-1与ACE2-1结合,解离常数 (KD) 为~4.4nM,与文献一致.
结论:
- 开发的参考材料 (ACE2-1和OMIC-1) 具有良好的特征,并且适用于SARS-CoV-2血清学试验.
- 这些RM为标准化血清学测试提供了基础,提高了诊断准确度.
- 特征的结合亲和力验证了尖端蛋白RM的功能完整性,用于测试开发.
