净化重组生成的体静止素-28,比较酸和聚乙烯胺作为大肠杆菌提取辅助剂

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 蛋白质工程是指蛋白质工程.
• 生物化学 生物化学

背景情况:

• 对于诊断和治疗至关重要,重组生产正在成为化学合成的可持续替代品.
• 重组方法提供了诸如高产量,减少有毒废物和适当的蛋白质折叠等优势.
• 索马托斯坦-28是一种具有一个二硫化键的28氨基酸激素,是优化下游净化过程的优秀模型.

研究的目的:

• 使用CASPONTM技术在大肠杆菌的周围质中证明索马托斯坦-28的高效重组生产.
• 介绍和评估两种不同的下游净化策略,用于亲和标记索马托斯坦-28.
• 为了确认纯度,产量和正确的二硫化物键的形成,净化索马托斯坦-28.8.

主要方法:

• 利用CASPONTM技术,在大肠杆菌周围质中进行亲和标记索马托斯坦-28的可溶性表达.
• 开发并比较了两种下游净化途径,使用盐酸和聚乙烯胺作为提取辅助剂.
• 采用逆相高性能液态染色学 (RP-HPLC) 和质谱仪用于过程监测和产品分析.

主要成果:

• 通过CASPONTM系统和高效的标签切割实现了高可溶性索马托斯坦-28表达.
• 通过多个下游步骤证明了索马托斯坦-28的有效净化,产生纯溶液.
• 证实了正确的二硫化物键形成和最终产品的高纯度,并显著去除了宿主细胞蛋白,DNA和内毒素等杂质.

结论:

• 卡斯邦TM技术为复合生产和净化体静止素-28.8提供了一个有效的平台.
• 开发的下游净化过程是稳健的和可扩展的,确保高质量的产品.
• 这种方法突出了用于治疗和诊断应用的重组生产的潜力.