在Bacillus thuringiensis中插入CRISPR-Cas9介导的条形码,用于替代品跟踪

科学领域:

• 微生物学 微生物学
• 遗传学 是一个遗传学.
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 替代生物对安全研究危险的病原体至关重要,如Bacillus anthracis.
• 区分试验菌株与污染物对于准确的研究结果至关重要.
• 遗传条形码提供了一种追踪和识别特定微生物菌株的方法.

研究的目的:

• 开发一种使用CRISPR-Cas9.9在Bacillus thuringiensis中插入独特的遗传条形码的简单方法.
• 为检测这些条形码建立定量聚合酶链反应 (qPCR) 试验.
• 评估条形码的稳定性和基因组工程过程的安全性.

主要方法:

• 使用CRISPR-Cas9基因编辑与单个等离子体用于条码插入到Bacillus thuringiensis.
• 开发并验证了用于检测五种不同的遗传条形码的qPCR测试.
• 进行了全基因组测序,并分析了工程菌株中潜在的Cas9脱位.

主要成果:

• 在Bacillus thuringiensis中成功插入了五个不同的遗传条形码.
• 经过五个运动和发芽周期,证明了条形码的稳定性.
• 全基因组测序显示,突变与预测的Cas9脱位之间没有相关性,这表明特异性很高.

结论:

• 克里斯普尔-Cas9方法提供了一种简单而有效的方法来创建条形码的Bacillus thuringiensis菌株.
• 这种方法有助于在研究环境中跟踪代理生物.
• 基因组工程策略是精确的,并且不引入显著的非目标突变,支持其在各种Bacillus物种中的使用.