通过光诱导的超极化NMR快速确定蛋白质 - 连接体亲和力
Matthias Bütikofer1, Gabriela R Stadler1, Harindranath Kadavath1
1Institute for Molecular Physical Science, Vladimir Prelog Weg 2, 8093 Zürich, Switzerland.
Journal of the American Chemical Society
|July 3, 2024
概括
我们开发了一种使用光化学诱导的动态核极化 (光CIDNP) NMR的快速方法, 这种技术通过提供精确的亲和度测量和结合性表位信息,显著加速早期药物发现.
科学领域:
- 生物化学
- 结构生物学
- 医学化学
背景情况:
- 在药物设计中,蛋白质与配体的结合性决定至关重要.
- 目前的方法往往耗时且昂贵.
- 需要新的快速选技术来加速药物发现.
研究的目的:
- 提出一种新的,快速的方法来确定蛋白质与配体的结合性.
- 建立使用光 CIDNP NMR 的亲和度测量的方法框架.
- 证明该方法的准确性和适用于药物发现.
主要方法:
- 使用光化学诱导的动态核极化 (光CIDNP) 核磁共振.
- 测量对PDZ域和片段对PIN1的结合亲缘关系.
- 使用非光CIDNP可极化体的竞争结合实验.
- 与和转移差异 (STD) 的NMR相对应的光CIDNPNMR片段查.
主要成果:
- 使用仅0. 1mg的蛋白质,在5-15分钟内确定蛋白质- 连接物结合性.
- 验证了-PDZ域和片段-PIN1相互作用的方法的准确性.
- 在竞争强制性测试中被证明是成功的.
- 在碎片查中显示了光CIDNP和STD NMR之间的强烈相关性.
结论:
- 光 CIDNP NMR 方法提供了一个快速而准确的方法来测量微米到毫米的蛋白质 - 配体亲和度.
- 与传统方法相比,这种技术显著减少了实验时间和蛋白质需求.
- 该方法在一次扫描中提供了结合表位的洞察力,提高了早期药物发现.


