一个快速的人类肺组织解离协议,最大限度地提高细胞产量,最大限度地减少细胞应激

科学领域:

• 肺部医学 肺部医学
• 细胞生物学 细胞生物学
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 人类肺部包含各种各样的细胞类型,在疾病状态下变得更加复杂.
• 在单细胞水平上研究肺细胞需要协议,以最小的分子变化产生可行的细胞.
• 有效的分离协议对于肺组织单细胞分析至关重要.

研究的目的:

• 为人类肺组织开发和验证一种快速,高产率的单细胞解离协议.
• 将新的基于原酶的协议 (Col-Short) 与现有方法的疗效进行比较.
• 评估细胞活力,标记物完整性和解离后的激活状态.

主要方法:

• 开发了一种基于原酶的快速解离协议 (Col-Short) 用于患病的人类肺部扩张.
• 将Col-Short与其他四种解离协议进行了比较.
• 使用流细胞计,差异染色和定量实时PCR评估单细胞悬浮剂.
• 评估细胞产量,活力,表面蛋白质标记物裂变,以及激活/压力标记物的表达.

主要成果:

• 科尔-肖特协议产生了每克肺组织中最多的细胞数量.
• 细胞活力与其他协议相当.
• 科尔-肖特没有显示任何可观察到的表面蛋白质标记物裂变.
• 与其他方法相比,Col-Short观察到蛋白质激活标记和与压力相关的转录的表达较低.

结论:

• 科尔-肖特协议是一种快速有效的策略,用于从人类肺组织中产生高产单细胞悬浮液.
• 这种方法保持了细胞完整性,并最大限度地减少了分裂诱导的人工物,使其适合下游呼吸道细胞生物学研究.