洛伊丁-PAINT:F-actin的增强定量纳米尺度成像

科学领域:

• 细胞生物学 细胞生物学
• 生物物理学的生物物理.
• 显微镜的使用方法

背景情况:

• 丝状活性蛋白 (F-actin) 的动态对于细胞功能至关重要.
• 超分辨率显微镜对于可视化纳米级细胞结构至关重要.
• 现有的方法,如直接随机光学重建显微镜 (dSTORM),在量化和结构保存方面存在局限性.

研究的目的:

• 介绍法洛伊丁-PAINT,一种用于定量F-actin成像的新型超分辨率技术.
• 为了证明法洛伊丁-PAINT在保护微妙的细胞结构方面的能力.
• 为了使用商业可用的试剂实现定量蛋白特异性 PAINT.

主要方法:

• 开发使用内在法洛伊丁解离的法洛伊丁-PAINT.
• 在低染料度缓冲器中应用PAINT超分辨率显微镜.
• 化学促进法洛伊丁解离,以增强单分子标签.
• 在U2OS细胞和树突细胞 (DCs) 中对F-actin的成像.

主要成果:

• Phalloidin-PAINT 在整个细胞和微妙的膜突起中提供了一致的纳米级F-actin量化.
• 与dSTORM相比,提高了脆弱细胞结构的保护.
• 在暴露于脂多糖糖化物后,在小鼠DC中证明了F-actin再分配和改变的膜突起.

结论:

• 洛伊丁-PAINT提供了一种可靠的方法,用于定量超分辨率成像F-actin.
• 该技术在成像过程中改善了细胞超结构的保存.
• 这种方法为使用可访问的试剂进行定量蛋白特异性 PAINT 打开了道路.