精确量化十个甲基化纯素核化物通过高度敏感和稳定的同位素稀释的UHPLC-MS/MS
Lyuye Zhang1,2, Weibing Zhang1, Hailin Wang2,3,4
1Shanghai Key Laboratory of Functional Materials Chemistry, School of Chemistry & Molecular Engineering, East China University of Science and Technology, Shanghai 200237, China.
Analytical chemistry
|July 6, 2024
概括
一种新的UHPLC-ESI-MS/MS方法准确量化了12种细胞中的纯原核糖核酸,包括修饰形式. 这种技术增强了信号检测和分离异构体,有助于癌症生物标志物研究.
科学领域:
- 生物化学和分子生物学
- 分析化学 分析化学
- 癌症研究 癌症研究
背景情况:
- 细胞核酸/核酸在RNA代谢和疾病,特别是癌症中至关重要.
- 由于丰度低和矩阵效应,精确量化改性纯原核酸具有挑战性.
研究的目的:
- 开发和验证一种强大的稳定同位素稀释超高性能液体染色学-喷射电离-并联质谱法 (UHPLC-ESI-MS/MS) 方法.
- 在细胞样本中准确量化12种纯原核糖核酸,包括10种甲基化形式.
主要方法:
- 使用UHPLC-ESI-MS/MS与可热分解的二碳酸用于增强信号响应.
- 采用甲醇提取和固态提取 (SPE) 进行样品预处理.
- 实现了最佳的UHPLC分离,以解决具有挑战性的甲基化核酸异构体.
主要成果:
- 提高了ESI-MS/MS信号响应的1.7-24.5倍.
- 成功解析和量化了三种甲基化瓜诺辛异构体 (m1G,m2G,m7G) 和两种甲基化腺异构体 (m1A,m6A).
- 修饰核化物 (Gm,m1G,m2G) 的量化细胞内度,由于矩阵抑制,以前无法检测到.
- 同时量化了293T细胞中的9个纯氨酸核化物,跨越四个数量级.
- 实现了高回收率 (>90%),良好的精度,线性和低检测极限 (LOD).
结论:
- 开发的UHPLC-ESI-MS/MS方法为细胞内核酸量化提供了宝贵的工具.
- 这种方法有可能选纯氨酸核化物作为癌症的诊断和预后生物标志物.
- 能够量化用于细胞代谢组分析和临床研究的纯素表观遗传核酸.


