使用多个矩阵和分子技术,在马中注射和检测多目标rAAV基因兴奋剂载体

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 兽医科学是一门兽医科学.
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 基因兴奋剂,即用于提高表现的基因材料的非治疗性使用,在马术运动中越来越令人担忧.
• 有效的检测方法对于维护赛马和马术比赛的完整性至关重要.
• 基因相关病毒 (AAV) 载体通常用于基因治疗和潜在的基因兴奋剂应用.

研究的目的:

• 评估不同的生物矩阵来检测马匹的基因兴奋剂.
• 为了比较多种DNA检测技术 (qPCR,数字PCR,NGS) 的灵敏度和相关性.
• 在马体内注射后评估AAV载体的时间检测概况.

主要方法:

• 设计了一种定制的腺相关病毒血清型8载体,具有特定的PCR结合点.
• 载体被肌肉内注射给两匹纯血统马,生物样本 (血,全血,干血斑点,毛发根球泡) 在不同的时间点收集.
• 使用定量聚合酶链反应 (qPCR),数字PCR和下一代测序 (NGS) 进行了DNA分析.

主要成果:

• 在qPCR,数字PCR和NGS之间观察到强烈的相关性,用于载体检测,尽管数字PCR在低度下显示出较低的灵敏度.
• 给药后不久,在血和全血中发现了高载体度,在几天内迅速下降到微量水平.
• 干血斑点显示载体水平低于全血,但保持了类似的检测窗口. 值得注意的是,在一个马的发根球泡中检测到载体DNA,在一个马的治疗后一个月.

结论:

• 多种检测方法可以有效地识别基因兴奋剂载体,在不同度下灵敏度的变化.
• 血液中载体DNA的快速下降表明使用这些矩阵的长期检测存在局限性.
• 毛根球泡为在马群中扩展监测和检测基因兴奋剂提供了一个有希望的矩阵,可能会为未来的人类反兴奋剂策略提供信息.