使用滴滴数字PCR和DNA间隙染料在面粉中的VBNCSalmonella Typhimurium的定量检测和生存分析
1Department of Civil and Environmental Engineering, College of Design and Engineering, National University of Singapore, Singapore, Singapore.
Microbiology spectrum
|July 8, 2024
概括
检测可生存但不可培养 (VBNC) 沙门氏菌对于食品安全至关重要. 使用DNA间隙染料的数字PCR (dPCR) 有效量化食品中的VBNC沙门氏菌,为传统方法提供了快速的替代方案.
科学领域:
- 食品微生物学 食品微生物学
- 分子生物学分子生物学
- 食品安全科学 食品安全科学
背景情况:
- 文化依赖的方法难以检测可行的但不可培养的 (VBNC) 沙门氏菌,这构成了食品安全风险.
- 准确检测沙门氏菌对公共卫生至关重要,特别是对脆弱人群至关重要.
- 传统方法往往无法识别VBNC沙门氏菌,需要改进检测技术.
研究的目的:
- 评估可行性聚合酶链反应 (PCR) 检测食品中的VBNC沙门氏菌的有效性.
- 评估数字PCR (dPCR) 与DNA间隙染料相结合的应用,以量化可活的沙门氏菌细胞.
- 用DNA间隙染料建立dPCR作为一种快速替代方法,用于在食品中检测沙门氏菌.
主要方法:
- 在经过处理的沙门氏菌和注射的面粉样本上使用dPCR和定量PCR (qPCR) 的DNA间隙染料 (DyeTox13,DyeTox13 + EMA).
- 评估紫外线暴露后细胞膜完整性和酶活性.
- 在不同温度下在面粉样本中确定DNA衰变速率和D值.
主要成果:
- 使用DNA间隙染料的dPCR和qPCR成功地在低度下量化了可活的沙门氏菌细胞,而盘子计数失败了.
- 紫外线暴露的持续时间影响了酶活性,由DyeTox13和DyeTox13 + EMA的减少基因拷贝数量表明.
- 在面粉中较高的温度下,DNA间隙染料显示了更快的代谢活动损失,这表明存在VBNC沙门氏菌.
- 在DyeTox13染料和数之间有很强的相关性,表明DyeTox13是快速检测沙门氏菌的替代品.
结论:
- 结合dPCR和DNA间隙染料,有效评估沙门氏菌的生存能力,加强对食品中的VBNC形式的监测.
- 这种方法为检测可活的沙门氏菌提供了比传统的依赖培养的技术更精确,更有效的替代方案.
- 这些发现有助于改善食品安全,通过更好地控制由沙门氏菌引起的食物传播疾病.
