细胞外囊泡隔离方法可以识别从长期感染的T细胞释放出的独特的HIV-1颗粒

科学领域:

• 病毒学 病毒学
• 细胞生物学 细胞生物学
• 生物物理学的生物物理.

背景情况:

• 人类免疫缺陷病毒1型 (HIV-1) 通常以特定的大小参数为特征.
• 细胞外粒子 (EPs) 在细胞通信和病原体传播中发挥着不同的作用.
• 超出已确定的范围的HIV-1的生物物理和功能性质需要进一步研究.

研究的目的:

• 为了分析超细胞颗粒 (EPs) 与人类免疫缺陷病毒1型 (HIV-1) 组件超出了公认的尺寸范围.
• 描述这些粒子的生物物理,生物化学和功能性质.
• 调查小型HIV-1相关EP的传染性和特征.

主要方法:

• 顺序差异超离心 (DUC) 用于从艾滋病毒感染的细胞中分离五个分量 (Frac-A到Frac-E).
• 粒子尺寸分布分析,包括中位数和平均尺寸.
• 免疫光和单粒子分析技术,如dSTORM (直接静态光学重建显微镜).
• 使用抗CD63抗体进行感染性测定和免疫减弱.

主要成果:

• 分数Frac-A到Frac-D显示异质大小>100 nm,而Frac-E包含小EP (<50 nm).
• Frac-E 独特的含有 EPs 对 CD63,HSP70 和 HIV-1 蛋白质阳性,包括膜保护的整合酶.
• 单颗粒分析证实了在Frac-E颗粒上CD63,HIV-1整合酶和Env糖蛋白的局部化.
• Frac-E EPs具有传染性,并且通过抗CD63免疫减弱减少了传染性,表明在传染性小EP上CD63.

结论:

• 这项研究确定了50nm以下的传染性小HIV-1颗粒 (smHIV-1),挑战了传统的生物物理特性.
• 这些发现表明,细胞外囊泡 (EV) 隔离方法可以揭示以前未被识别的传染性病毒颗粒.
• 在传染性小EP上存在CD63对理解HIV-1病原和病毒传播有影响.