在小鼠的CRISPR/Cas9微注射中应用的zygote冷银行

科学领域:

• 生殖生物学 生殖生物学
• 基因编辑技术的技术
• 结冷保存是一种冷保存.

背景情况:

• 克里斯普尔/卡斯9微注射需要持续供应胚胎,往往需要大量的动物繁殖和胚胎采集.
• 紫体玻璃化提供了一个潜在的解决方案,可以创建易于获得的胚胎库存,将胚胎生产与微注射时间脱.

研究的目的:

• 为了评估玻璃化加热的囊胞的适用性作为CRISPR/Cas9微注射的来源.
• 为了在体外和体内环境中比较使用新鲜和玻璃化囊的微注射的效率和结果.

主要方法:

• 将CRISPR/Cas9微注入新鲜 (F组) 和经过玻璃化加热 (V组) 的胚胎中.
• 在体外培养微注射的阴囊细胞到囊胚阶段,以评估存活率,分裂率,发育率和突变率.
• 在体内将微注射的阴茎转移给受体雌性,以评估胚胎存活率,裂变,怀孕,出生率和后代突变率.

主要成果:

• 在体外:类似的胚胎存活率和分裂率;在新鲜的胚胎中,发育率显著更高. 在体内:在玻璃化胚胎中胚胎存活率显著更高;在不同组之间,分裂,怀孕和出生率相似.
• 与体内玻璃化胚胎相比,新鲜胚胎组的后代突变率明显高于体内玻璃化胚胎组.

结论:

• 玻璃化加热生殖细胞是CRISPR/Cas9微注射的可行替代方案,特别是当新鲜胚胎的可用性受到限制时.
• 齐戈特冷银行 (zygote cryobanking) 便于按需进行微注射,减少了对动物持续繁殖和维护的需求,从而促进了CRISPR技术的采用.