通过结合RT-复合酶辅助放大和CRISPR/Cas13a与侧流滴杆相结合,用于传播脑炎病毒的新型快速视觉核酸检测技术

科学领域:

• 病毒学 病毒学
• 分子诊断学 分子诊断学
• 公共卫生 公共卫生

背景情况:

• 传染性脑炎病毒 (TBEV) 构成重大威胁,导致严重的神经疾病和死亡.
• 目前的诊断方法,如血清学测定有局限性,包括延迟抗体检测和交叉反应性.
• 现有的分子诊断 (例如RT-qPCR) 需要专门的设备和专业知识,限制了可访问性.

研究的目的:

• 开发用于TBEV检测的快速,可视和可访问的分子诊断方法.
• 克服目前TBEV诊断方法的局限性.
• 创建一个适合各种临床环境的临床检测.

主要方法:

• 结合RT-复合酶辅助放大 (RT-RAA) 与CRISPR/Cas13a系统.
• 集成了CRISPR/Cas13a系统与侧流量计棒进行视觉读取.
• 使用疑似TBEV患者和健康志愿者的临床样本验证了测定.

主要成果:

• 对TBEV的诊断灵敏度达到了50 CFU/ml.
• 没有证明与其他测试病毒的交叉反应性.
• 在37-42°C之间的温度下,在1小时内提供视觉结果.
• 临床样本分析显示100%的灵敏度和特异性,与RT-qPCR结果一致.

结论:

• 开发的RT-RAA-CRISPR/Cas13a-LFD测定是一种敏感和特定的TBEV分子诊断工具.
• 这种方法为TBEV诊断提供了快速,视觉和无仪器的方法.
• 这种测试有可能作为传染性脑炎的临床检测,特别是在资源有限的地区.