STING抑制使初级血管细胞中基于等离子体的高效基因表达成为可能:一种简单且具有成本效益的传染协议

科学领域:

• 细胞生物学 细胞生物学
• 分子生物学分子生物学
• 遗传学 是一个遗传学.

背景情况:

• 等离子体转移对于研究蛋白质功能至关重要,但在初级血管内皮细胞 (EC) 和光滑肌细胞 (SMC) 中是低效的.
• 细胞中的STING (干扰素基因刺激器) 途径识别了外来DNA,阻碍了外源基因表达并促进了DNA降解.
• 克服这些传染障碍对于推进血管生物学和相关领域的研究至关重要.

研究的目的:

• 调查STING抑制剂在提高人大动脉内皮细胞 (HAECs) 和大动脉光滑肌细胞 (SMCs) 中的等离子体传染效率方面的疗效.
• 评估STING抑制对外源蛋白的表达水平的影响,包括细胞染色体b5减少酶4 (CYB5R4) 和增强绿色光蛋白 (EGFP).
• 评估增强转染对特定蛋白质如内皮氧化合成酶 (eNOS) 的表达和活性的功能后果.

主要方法:

• 主要的HAEC和SMC使用Lipofectamine 3000与编码CYB5R4和EGFP的质粒或野生类型/突变eNOS进行了转染.
• 两种STING抑制剂,MRT67307和BX795,在传染期间和之后被使用.
• 量化了蛋白质表达水平,在血管内皮生长因子刺激后,在Serine 1177 (S1177) 评估了eNOS酸化.

主要成果:

• 在HAEC中,MRT67307显著增强了CYB5R4和EGFP的表达,即使在去除抑制剂后,效果也持续.
• 刺激抑制剂MRT67307和BX795也改善了人类和老鼠大动脉SMC中的等离子体表达.
• 过度表达的野生类型的eNOS,但不是S1177A突变,被血管内皮生长因子酸化,证实了蛋白质的功能.

结论:

• 兴奋剂抑制剂是克服初级EC和SMC中低转染效率的可行策略.
• 这种方法促进了强大的外源蛋白表达,使得这些关键细胞类型的详细功能研究成为可能.
• 这些发现为研究具有挑战性的原始细胞中的蛋白质功能提供了一种有价值的方法,并可能扩展到具有转染困难的其他细胞类型.