通过基因组DNA编辑将多倍体和倍体的Saccharomyces sensu stricto菌株转化为leu2突变体
Kazuya Kiyokawa1,2, Tetsushi Sakuma3, Kazuki Moriguchi1
1Program of Basic Biology, Graduate School of Integrated Sciences for Life, Hiroshima University, Higashi-Hiroshima, Hiroshima, 739-8526, Japan.
Applied microbiology and biotechnology
|July 12, 2024
概括
这项研究开发了CRISPR-Cas9等离子体,以在Saccharomyces sensu stricto酵母中产生leu2突变. 这一突破使现有的重组等离子体在各种酵母菌株中得到更广泛的使用.
科学领域:
- * 分子生物学 * 分子生物学
- * 酵母遗传学公司
- * 合成生物学 * 合成生物学
背景情况:
- * 对于Saccharomyces cerevisiae,存在大量的重组等离子体资源.
- *将它们应用于更广泛的Saccharomyces sensu stricto群体受到原性和多性自然/工业菌株的阻碍.
- * 传统的等离子体需要辅性宿主菌株 (例如,leu2),这些目标菌株中不常见.
研究的目的:
- * 通过使用DNA编辑,在Saccharomyces sensu stricto物种中设计辅性leu2突变体.
- * 克服用于重组等离子体应用的原性和多性酵母菌株的局限性.
- * 为了方便在各种酵母分离物中利用现有的大量重组塑性质库.
主要方法:
- * 用抗生素耐药基因修改一个全合一的CRISPR-Cas9等离子体 (pML104).
- *设计针对LEU2基因的指导序列,以有效编辑DNA.
- *将工程CRISPR-Cas9等离子体应用于Saccharomyces sensu stricto群中五种物种的七个菌株.
主要成果:
- * 在各种Saccharomyces sensu stricto菌株中成功生成leu2突变,包括自然分离物,工业菌株和全聚类菌株.
- * 已证明开发的CRISPR-Cas9系统在不同物种和种群水平上具有广泛的适用性.
- *确认了由此产生的酵母殖民地LEU2基因中设计突变的存在.
结论:
- *开发的CRISPR-Cas9等离子体有效地在各种Saccharomyces sensu stricto菌株中产生leu2突变.
- * 这种方法简化了原性和多性酵母菌株的转化为辅性.
- * 允许在酵母研究和工业中更广泛地使用和应用携带LEU2选择标记物的重组等离子体.
