基于CRISPR-Cpf1在Pichia pastoris中的集成地点的选和特征
Shupeng Ruan1,2, Yuxin Yang1,2, Xinying Zhang1,2
1Guangdong Key Laboratory of Fermentation and Enzyme Engineering, School of Biology and Biological Engineering, South China University of Technology, Guangzhou, 510006, China.
Synthetic and systems biotechnology
|July 15, 2024
概括
研究人员使用CRISPR-Cpf1技术在Pichia pastoris中确定了15个新的基因组整合部位. 这些地点增强了生物制造的基因工程,使得高效的多基因通路建设成为可能.
科学领域:
- 微生物学 微生物学
- 合成生物学 合成生物学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 皮奇亚牧师是一种甲基转化酵母,由于其利用甲醇的能力,对生物制造有价值.
- 为了复杂的生物合成途径,对P. pastoris的基因操纵受到缺乏合适的基因组整合工具的限制.
研究的目的:
- 确定和描述P. pastoris.中的新型基因组整合部位.
- 扩大用于P. pastoris.代谢工程和细胞工厂建设的工具包.
主要方法:
- 使用CRISPR-Cpf1基因组编辑技术,选新的整合部位.
- 增强绿色光蛋白 (EGFP) 被用作记者蛋白来评估整合效率和表达水平.
- 通过整合异质生物合成途径来验证新站点,包括素和卡尔文-本森-巴什姆 (CBB) 循环.
主要成果:
- 在P. pastoris中确定并选了15个新的整合地点.
- 集成效率在10-100%之间,表达强度不同.
- 从CBB循环中成功整合了八个基因,证明了这些部位对于大片段整合的实用性.
结论:
- 鉴定到的整合部位为P. pastoris.中的基因表达调节提供了多功能选择.
- 这些部位促进了复杂的代谢途径的构建,改善了P. pastoris作为细胞工厂.
- 这些发现提高了P. pastoris基因工程的效率,用于先进的生物制造应用.
