化循环你的网格:深入玻璃化和重复使用切割的网格,以推进cryoEM民主化
Viacheslav Serbynovskyi1, Jing Wang1, Eugene Yd Chua1
1Simons Electron Microscopy Center, New York Structural Biology Center, NY, NY, USA.
Research square
|July 16, 2024
概括
通过CryoCycle改进了CryoEM的民主化,这是一种在涂抹和玻璃化后重复使用切割的网格的方法. 这种技术可以降低用于冷电子显微镜的结供应的成本.
科学领域:
- 结构生物学 结构生物学
- 生物物理学的生物物理.
- 材料科学 材料科学 材料科学
背景情况:
- 低温电子显微镜 (CryoEM) 对于确定生物大分子的高分辨率结构至关重要.
- 专用耗材的高成本,特别是用于冷,限制了CryoEM的广泛采用和民主化.
- 目前的方法通常需要一次性使用的电网,产生大量的废物和增加实验费用.
研究的目的:
- 引入和验证一种新的方法,CryoCycle,以降低成本并提高CryoEM样本准备的可访问性.
- 为了证明可靠的涂抹,玻璃化和重新使用切割的冷EM网格.
- 通过可持续的电网利用,实现具有成本效益的CryoEM分析.
主要方法:
- CryoCycle的开发:一种在剪切的冷EM网格上准备,涂抹和玻璃化蛋白质样本的协议.
- 在液态乙中结含有纯化蛋白质的切割网格,以获得玻璃状冰.
- 对多个蛋白质样本的网格重复使用和在金涂,预剪切的网格上对细胞材料的玻璃化进行演示.
主要成果:
- 成功的玻璃化净化蛋白质使用剪切的网格沉入液态乙.
- 对多个不同的蛋白质样本,已证明可靠地重复使用切割的冷EM网格.
- 在预先处理的,金的,剪切的网格上实现了薄细胞区域的玻璃化.
结论:
- 通过使电网可重复使用,CryoCycle方法显著提高了CryoEM的经济可行性.
- 这种方法通过降低消耗成本来解决CryoEM民主化中的一个关键瓶.
- CryoCycle为高质量的CryoEM样本准备提供了一个可持续和可扩展的解决方案.
