通过流细胞计量对小鼠的增殖和神经活跃视网膜细胞进行量化

科学领域:

• 神经科学是一个神经科学.
• 细胞生物学 细胞生物学
• 眼科医生 眼科 眼科

背景情况:

• 成年哺乳动物的视网膜通常缺乏损伤后神经元再生的能力.
• 以前的研究表明,局部应用PNU-282987,一种选择性α7尼古丁乙胆受体 (nAChR) 激动剂,增加成年小鼠的视网膜神经元数量.
• 使用光免疫标记的研究表明,在治疗alpha7nAChR激动剂后,视网膜细胞的线粒活性增加,但这种方法具有复杂化限制.

研究的目的:

• 开发和描述一种新型的流细胞测量协议,用于对分离的视网膜细胞进行多重分析.
• 为了使多种视网膜细胞类型和前代细胞的同时标记和分析.
• 研究PNU-282987对成年哺乳动物视网膜细胞增殖和神经发生的作用.

主要方法:

• 一个逐步的协议,分离成年老鼠视网膜和准备细胞流细胞计.
• 使用氧氨 (BrdU) 结合物标记增殖细胞.
• 采用流式细胞计量与多重抗体标记来分析视网膜质细胞,棒光受体,Müller glia和Müller glia衍生的原始细胞.

主要成果:

• 成功建立了一种流细胞计法,用于分析分离的视网膜细胞中的多种标记物.
• 证明了标记和区分各种视网膜细胞种群的能力,包括祖细胞.
• 已确认的PNU-282987治疗显著增加成人视网膜中线粒活性和增殖细胞.

结论:

• 开发的流细胞计量协议为视网膜细胞群和神经发生的高通量分析提供了一个强大的工具.
• 在成年哺乳动物中,局部应用α7nAChR激动剂PNU-282987有效诱导视网膜前细胞的增殖.
• 这种方法为进一步研究视网膜再生策略的基础提供了基础,该策略的目标是针对来自Müller glia的祖先.