提供CRISPR/dCas9系统的协议,用于在固体瘤中进行表观遗传编辑,使用脂纳米颗粒封装RNA

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 分子生物学分子生物学
• 癌症研究 癌症研究

背景情况:

• 使用非活化Cas9 (dCas9) 与效应器域融合的CRISPR表观遗传编辑系统,显示出针对癌症转录异常的前景.
• 基于CRISPR的癌症治疗目前的局限性包括无效的体内输送,大分子大小和潜在的免疫性.
• 对于CRISPR的病毒传递方法面临的挑战包括有限的包装能力,基因组整合风险和免疫性.

研究的目的:

• 描述CRISPR表观遗传编辑的优化信使RNA (mRNA) 和引导RNA (gRNA) 的设计.
• 概述脂质纳米粒子 (LNP) 配方,以有效地传递dCas9效应器mRNA.
• 提供用于将mRNA和gRNA联合封装成LNP的协议,用于体外和体内输送.

主要方法:

• 为目标基因激活或抑制设计和优化dCas9效应器mRNA和gRNA.
• 脂质纳米颗粒 (LNP) 的配方,用于封装mRNA和gRNA.
• 将dCas9效应器mRNA和gRNA联合封装到LNP中.
• 在体外向细胞系输送,在体外向乳腺癌小鼠模型输送.

主要成果:

• 为表观遗传编辑成功设计了优化的dCas9效应器mRNA和gRNA.
• 开发适合dCas9 mRNA输送的LNP配方.
• 建立用于将mRNA和gRNA联合封装到LNP中的协议.
• 在乳腺癌模型中使用LNP进行体外和体内CRISPR组件的输送.

结论:

• 基于mRNA和LNP的传递系统为CRISPR在癌症治疗中的表观遗传编辑提供了一个可行的非病毒战略.
• 这种方法克服了与dCas9融合蛋白和多式交付相关的关键交付挑战.
• 开发的协议有助于将CRISPR表观遗传编辑转化为癌症治疗的潜在临床应用.