作为输血应用中的潜在工具的CRISPR/Cas9编辑K562细胞系:Knockout of Vel抗原基因
Jiaxuan Yang1, Aijing Li1, Minghao Li1
1Molecular Immunohematology Lab, Shanghai Institute of Blood Transfusion, Shanghai Blood Center, Shanghai, China.
概括
研究人员开发了一种方法,使用CRISPR-Cas9基因编辑来创建Vel血型淘汰细胞. 这些工程细胞可以被诱导分化为红细胞,推进罕见血型的研究.
科学领域:
- 血液学 血液学 血液学
- 遗传学 遗传学 是一个
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 维尔血型表型很少见,由于试剂有限,很难识别.
- 红色素抗原的基因组编辑和为罕见血型生成淘汰细胞系尚未得到充分研究.
研究的目的:
- 选高效率的小导向RNA (sgRNA) 序列用于CRISPR-Cas9编辑.
- 为了生成Vel血型抗原淘汰赛 (KO) 细胞系.
- 为了评估Vel KO细胞的红状腺分化.
主要方法:
- 通过桑格测序在HEK 293T细胞中进行sgRNA查.
- 在K562细胞中使用lentivirus转导编辑CRISPR-Cas9基因.
- 韦尔蛋白表达分析由西方Blot.
- 通过流细胞计检测检测红状腺标志物 (CD235a,CD71).
- 血红蛋白量化和Giemsa染色用于红状腺分化.
主要成果:
- 一个高效的sgRNA被确定并用于CRISPR-Cas9编辑.
- 两个Vel KO K562细胞克隆具有2或4个基删除没有显示Vel蛋白表达.
- 与对照组相比,KO克隆中的血红蛋白诱导的红状腺分化在红状腺标记物和血红蛋白水平上表现出显著的差异.
- 观察到的形态变化表明了红细胞分化.
结论:
- 在K562细胞中成功生成Vel红色抗原KO单细胞克隆,使用优化的sgRNA.
- 证明了在这些工程细胞中诱导红状腺分化的潜力.
