改善了用于酵母酵母中的F-actin结构实时成像的工具

科学领域:

• 细胞生物学 细胞生物学
• 细胞骨动力学 细胞骨动力学
• 分子成像学分子成像学

背景情况:

• 20多年来,Abp140-GFP一直是活成像酵母活性电缆的标准.
• 在酵母细胞中,abp140-gfp在母体和芽区之间表现出非对称的行为蛋白结构装饰.

研究的目的:

• 开发一种改进的探针,用于真实成像酵母活性细胞骨架.
• 调查导致Abp140-GFP不对称装饰的因素.

主要方法:

• 突变性研究以确定Abp140的区域,这些区域对于F-actin结合和装饰至关重要.
• 表达形式的金像 (Bni1-Bnr1和Bnr1-Bni1) 来评估形式独立的装饰.
• 开发和测试与光蛋白 (1x或3xmNeonGreen) 融合的Lifeact,从内源ABP140促进体表达.

主要成果:

• 通过Abp140-GFP进行不对称的装饰需要F-actin结合,并且独立于电缆组装所涉及的特定形式 (Bni1/Bnr1).
• Lifeact-3xmNeon在母体和芽中均地装饰了actin补丁和电缆.
• Lifeact-3xmNeon显著增强了活成像检测的动素结构,而不会改变其动态或细胞生长.
• 新的探测器可以可视化向内的电缆生长和与真空细胞的相互作用,以及对细胞动力学actomyosin环进行强有力的标记.

结论:

• Lifeact-3xmNeon是酵母F-actin结构的实时成像的卓越探测器,提供统一和强烈的标签.
• 这种探测器可方便对以前难以观察的动态和相互作用进行详细的可视化.
• Lifeact-3xmNeon的低水平,高强度标签特征表明它在其他生物体中具有潜在的实用性,而高 Lifeact 表达可能是有害的.