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Updated: May 14, 2026
07:56
Genome Editing in Mammalian Cell Lines using CRISPR-Cas
Published on: April 11, 2019
21.6K
对植物RNA导向基因组编辑的效率进行定量测试
Martin Bircheneder1, Tom Schreiber2, Alain Tissier2
1Genetics, Faculty of Biology, LMU Munich, Grosshaderner Str. 2-4, Martinsried, D-82152, Germany.
The Plant journal : for cell and molecular biology
|July 20, 2024
概括
研究人员开发了新的记者测试,以有效量化CRISPR-Cas基因编辑. 这些测试使卡斯内核酶系统的优化能够实现精确的基因删除,大大推进了基因工程应用.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 植物生物技术 植物生物技术
- 基因工程是一种基因工程.
背景情况:
- 克里斯普尔-卡斯系统是针对性基因编辑的强大工具.
- 删除整个开放式读取框架 (ORF) 对功能基因研究有价值.
- 编辑效率在很大程度上取决于所使用的特定的Cas内核酶.
研究的目的:
- 为CRISPR-Cas构造的定量比较和优化开发和验证报告员测试.
- 为了能够有效地检测和量化由CRISPR-Cas系统介导的基因删除事件.
- 建立适用于各种基因编辑目标和生物体的多功能方法.
主要方法:
- 在记者基因的mRNA中开发了两种采用Endoribonuclease Csy4点的记者"开关"测试.
- 采用CRISPR-Cas系统来创建双链断裂,在Csy4ORF旁边进行删除.
- 使用记者基因表达 (火 luciferase,mCitrine) 来间接量化Csy4删除.
- 在 *Nicotiana benthamiana* 和 *Lotus japonicus* 中使用参考基因进行正常化的验证测试.
主要成果:
- 报告员测试表明,报告员基因表达和成功的Csy4 ORF完全删除之间有>90%的相关性.
- 这些测试有效量化了CRISPR-Cas介导的基因删除事件.
- 开发的系统在不同的植物物种和组织中被证明是可靠的.
结论:
- 这种Csy4毛环模块是CRISPR-Cas介导的基因删除的有效和多功能目标.
- 这些记者分析对于优化Cas内核酶版本和基因编辑策略非常有价值.
- 该原则广泛适用于各种基因编辑目标,包括单双链断裂,在各种各样的生物体.
