基于 ψ 基因的基于 TaqMan 的实时 PCR 的开发,用于对 CAR-T 细胞的定量检测
Han Hu1, Yining Cheng1, Jinjin Cao1
1National ''111'' Center for Cellular Regulation and Molecular Pharmaceutics, Key Laboratory of Fermentation Engineering (Ministry of Education), Hubei Provincial Cooperative Innovation Center of Industrial Fermentation, College of Bioengineering, Hubei University of Technology, Wuhan, 430068, PR China.
Analytical biochemistry
|July 20, 2024
概括
一种新的TaqMan实时qPCR方法准确量化了仿真抗原受体T细胞 (CAR-T) 逆转录病毒拷贝数. 这种敏感且可重复的技术对于癌症免疫疗法研究和临床应用至关重要.
科学领域:
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 分子生物学分子生物学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 化学抗原受体T细胞 (CAR-T) 疗法代表了癌症免疫疗法的重大进展.
- 以逆转录病毒为媒介的基因转移通常用于将CAR结构引入T细胞以治疗目的.
- 准确量化复原病毒拷贝数量对于评估CAR-T细胞在研究和临床环境中的有效性和安全性至关重要.
研究的目的:
- 开发和验证一种精确的定量方法,用于评估CAR-T细胞治疗中的逆转录病毒拷贝数.
- 建立一种敏感,特定和可重复的方法来量化CAR构造的集成DNA水平.
主要方法:
- 开发TaqMan实时定量PCR (qPCR) 试验,针对逆转录病毒的 ψ 基因序列.
- 在体外和体内验证qPCR方法的灵敏度,特异性,可复制性和稳定性.
- 确定放大效率,回归方程和检测极限.
主要成果:
- 开发的TaqMan实时qPCR方法显示了高放大效率 (97.47%) 和线性 (R2 = 0.999).
- 该试验表现出极好的灵敏度,最低检测极限为43.1副本/μL,并且没有与未转换的细胞交叉反应.
- 内部和跨组的变化率始终低于4%,证实了该方法的高可重复性和稳定性.
结论:
- 已建立的TaqMan实时qPCR方法提供了一个强大的,具有成本效益的工具,用于准确量化CAR复原病毒复制数.
- 这种经过验证的方法适用于CAR-T细胞研究和临床开发中的体外和体内应用.
- 该方法的灵敏度,特异性和可重复性支持其在推进癌症免疫治疗策略中的实用性.
