基于Avi-Tag融合G蛋白合受体的细胞膜染色学选材料的构建
Yanni Lv1,2, Yamin Wang1,2,3, Na Guo1,2
1School of Pharmacy, Xi'an Jiaotong University, 76# Yanta West Road, Xi'an 710061, China.
Analytical chemistry
|July 23, 2024
概括
我们开发了一种使用Avi标签的新型细胞膜染色法,用于选与Mas相关的G蛋白结合受体X2 (MrgprX2) 抗剂. 这种方法成功地确定了维特西卡,显示出抗过敏作用和减少非特异性吸附.
科学领域:
- 药理学 药理学是指药理学的学科.
- 生物化学 生化学
- 分析化学 分析化学
背景情况:
- 与Mas相关的G蛋白结合受体X2 (MrgprX2) 与过敏反应和过敏性疾病有关.
- 现有的基于蛋白质标签的细胞膜染色学 (CMC) 方法用于连接体发现,面临非特异性吸附的挑战.
- 艾维标签系统通过BirA催化提供特定的生物蛋白相互作用.
研究的目的:
- 开发一种新的细胞膜静止阶段 (CMSP) 用于MrgprX2连接体查.
- 建立一个使用IB-Avi标签系统的2D/CMC-HPLC/MS平台.
- 从天然产品提取物中识别和验证MrgprX2抗剂.
主要方法:
- 构建一个MrgprX2-Avi-tag HEK293T细胞线.
- 合成的2-iminobiotin (IB) 修饰的凝 (SiO2-IB).
- 通过BirA催化,将Avi标记的MrgprX2细胞膜固定在SiO2-IB上,创建用于2D/CMC-HPLC/MS查的CMSP.
主要成果:
- 一个基于IB-Avi标签的新型CMSP成功开发和特征化.
- 2D/CMC-HPLC/MS平台有效地选了来自*Viticis Fructus*提取物中的维特西卡.
- 证实维特西卡能向MrgprX2,并表现出*in vitro*和*in vivo*的抗过敏作用.
- 在查过程中,IB-Avi标签系统显著降低了非特异性吸附.
结论:
- 基于IB-Avi标签的CMC方法为选MrgprX2配体提供了一种有效的方法.
- 这种2D/CMC平台证明了其适用于识别具有减少非特异性结合的潜在候选药物.
- 已识别的化合物 - - 维特西卡,显示出作为一种针对MrgprX2.2的抗过敏剂的前景.
