在Penicillium crustosum中建造一种用于真菌二次代谢物生物合成的表达平台

科学领域:

• 菌类学 菌类学是指菌类学.
• 合成生物学 合成生物学
• 药物发现 药物发现 药物发现

背景情况:

• 丝状真菌产生有价值的生物活性天然产品,对于药物发现至关重要.
• 许多真菌生物合成基因在实验室条件下保持沉默,限制了新化合物的发现.
• 异质表达是一种有前途的策略,但宿主特定的局限性阻碍了它的成功.

研究的目的:

• 为了设计一个Penicillium crustosum宿主高效的异质基因表达.
• 为了克服诸如低基因向,高代谢基因背景和缺乏选择标志物的挑战.
• 创建一个多功能平台,用于发现新的真菌衍生药物.

主要方法:

• 使用分割标记器和CRISPR-Cas9技术构建了一个缺乏pyrG的P. crustosum菌株.
• 通过删除ligD和pcribo来改善基因向,使额外的选择标记物成为可能.
• 通过不激活高度表达的基因群和pcr4401色素基因,减少代谢基因背景,整合Aspergillus nidulans wA表达部位.

主要成果:

• 实现了高基因向效率,并在P. crustosum.中引入了一种新的选择标记物.
• 成功降低了二次代谢物背景,并消除了正基甲基的形成.
• 通过在wa位点表达多基酸合成酶基因和基因集群来证明概念的证明,可以通过白化表型轻松检测.

结论:

• 开发了一个高效的P. crustosum异构表达宿主.
• 为真菌基因表达提供了一个平台,减少了代谢基因背景,并促进了与阿斯伯吉卢斯尼杜兰斯的构造兼容性.
• 这种工程宿主有助于从真菌中发现新的生物活性天然产品.