温度控制的快速蛋白质液体色谱的综合系统. 第四章 没有了 连续"一列"的"低盐"疏水性相互作用色谱
Alexander Brean1, Tim W Overton2, Daniel G Bracewell3
1School of Chemical Engineering, College of Engineering and Physica1, University of Birmingham, Edgbaston, Birmingham B15 2TT, England, UK.
这项研究引入了一种用于蛋白质净化的新型温度控制色谱系统. 移动冷却区反应堆 (TCZR) 允许高效的低盐疏水相互作用染色学 (HIC) 提高纯度.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 染色体学 染色体学 是一种染色体学.
- 蛋白质净化 蛋白质净化
背景情况:
- 疏水性相互作用色谱 (HIC) 是一种关键的蛋白质净化技术.
- 传统的HIC往往需要高度的盐分,并且可能难以精确控制.
- 开发高效的低盐HIC方法对于敏感的生物分子至关重要.
研究的目的:
- 开发和验证使用移动冷却区反应堆 (TCZR) 的低盐HIC温度控制的同位素过程.
- 为了优化牛血清白蛋白 (BSA) 的温度可逆结合和化条件.
- 评估TCZR-HIC用于连续蛋白质净化的性能.
主要方法:
- 系统开发一个温度控制的同位素HIC工艺.
- 使用批量结合和共聚焦扫描显微镜来定义过程条件.
- 在职脉冲响应温度切换HIC和移动冷却区HIC (TCZR-HIC).
- 研究了连续的TCZR-HIC与不同的BSA度和列条件.
主要成果:
- 脉冲响应TCZR-HIC在95.3%的纯度下实现了86.3%的BSA单体溶解,并显著减少了聚合物.
- 在0.25 mg·mL-1 BSA的连续TCZR-HIC产生了尖的,对称的峰值,具有一致的高单体纯度 (>94%).
- 量化单体产量是在显著减少二元/三元和高分子量 (HMW) 物种的情况下实现的.
- 较高的BSA度或杂的列损害了净化性能.
结论:
- 该TCZR系统为温度控制,低盐HIC蛋白质净化提供了一个有效的平台.
- 这种方法可以精确控制蛋白质结合和化,从而获得高纯度和产量.
- TCZR-HIC展示了治疗性蛋白质可扩展和高效下游加工的潜力.
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