高通量表面表位表位免疫亲和度隔离细胞外囊泡和下游分析
Ramin Khanabdali1, Michelle Mandrekar2, Rick Grygiel2
1INOVIQ Ltd., Notting Hill, VIC 3168, Australia.
Biology methods & protocols
|July 29, 2024
概括
一种新的表面皮层免疫 afinity (SEI) 隔离方法使得高通量,可重复的隔离细胞外囊泡 (EVs) 从血. 这种先进的技术为临床应用提供了高效的生物标志物发现.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 纳米医学是一种纳米医学.
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 细胞外囊泡 (EVs),包括外体,对诊断和治疗具有重大前景.
- 目前标准化,高通量EV隔离的局限性阻碍了临床翻译.
- 表面上皮管免疫亲和 (SEI) 隔离提供了使用亲和联结体的有针对性的方法.
研究的目的:
- 评估一种新的基于珠子的SEI方法,用于丰富特定的EV亚群.
- 评估该方法适用于高通量隔离和下游生物标志物分析的适用性.
- 为了证明与临床实验室工作流程的兼容性.
主要方法:
- 采用了基于磁珠的SEI用于从人体血中隔离EV.
- 执行了为 EV 标记器确认的 Western blot.
- 进行了用于蛋白质组分析的质谱和用于RNA分析的miRNA测序.
- 使用自动化,高通量颗粒处理仪器.
主要成果:
- 在被捕获的纳米颗粒中确认了EV标记物的存在,通过Western blot.
- 使用质谱学识别了1500多种蛋白质,包括已知的EV标记物.
- 通过测序和RT-qPCR检测到与EV相关的miRNA转录.
- 与使用自动化SEI的手动方法相比,实现了同等或更高的蛋白质和miRNA产量/回收.
结论:
- SEI是一种快速,高效和高通量方法,用于隔离丰富的EV群体.
- 这种技术减少了污染,并使特定的EV亚群的隔离成为可能.
- 成功实施高通量EV隔离和RNA提取,推进生物标志物发现和临床研究潜力.
