使用CRISPR-Csm进行单分子活细胞RNA成像.
Chenglong Xia1,2, David Colognori2,3, Xueyang Jiang2,3
1California Institute for Quantitative Biosciences (QB3), University of California, Berkeley, CA USA.
bioRxiv : the preprint server for biology
|July 29, 2024
概括
研究人员开发了单分子活细胞光 in situ 杂交 (smLiveFISH) 以可视化活细胞中未经修改的RNA. 这种方法追踪了内源的NOTCH2和MAP1BmRNA,揭示了不同的细胞局部化机制.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 细胞生物学 细胞生物学
- 遗传学 遗传学是一种遗传学.
背景情况:
- 了解单细胞中的RNA动态需要高分辨率的实时成像.
- 以前的方法无法实现未经修改的内源RNA分子的活细胞成像.
研究的目的:
- 开发一种用于在活细胞中直接可视化单个,未经修改的内源RNA分子的新方法.
- 在单细胞内实时研究特定mRNA转录的局部化机制.
主要方法:
- 开发了单分子活细胞光在位杂交 (smLiveFISH).
- 利用CRISPR-Csm复合体与多重导向RNA用于RNA向和可视化.
- 应用smLiveFISH来追踪各种细胞类型的内源NOTCH2和MAP1BmRNA,包括初级细胞.
主要成果:
- 在活细胞中成功可视化和跟踪了个体内源NOTCH2和MAP1BmRNA转录.
- 鉴定了NOTCH2mRNA在内质网膜中的同翻译转位.
- 观察到MAP1BmRNA向细胞外围的方向传输.
结论:
- smLiveFISH能够对未经修改的内源RNA进行强大,高分辨率的活细胞成像.
- 这项研究揭示了本地转录的独特的时空组织机制.
- 这种方法有可能揭示RNA局部化在细胞功能和疾病中的原理.


