在初级人类免疫细胞和造血干细胞中,用于CRISPR工程 (PERC) 的基核蛋白输送

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 基因编辑技术的技术
• 细胞生物学 细胞生物学

背景情况:

• 克里斯普尔核糖蛋白 (RNP) 复合体被广泛用于基因组编辑.
• 有效和温和地将CRISPR RNP输入人类初级细胞仍然是一个挑战.
• 现有的方法,如电穿孔,可以影响细胞活力和表型.

研究的目的:

• 为CRISPR工程 (PERC) 引入和优化支持的核蛋白输送,用于ex vivo基因组编辑.
• 为了证明PERC在人类原发性免疫细胞和造血干细胞和原生细胞 (HSPC) 中的有效性.
• 将PERC与现有的交付方法进行比较,强调其优势.

主要方法:

• PERC利用单一的双胞胎来将预先形成的CRISPR-RNP复合体输送到细胞中.
• 该方法涉及将CRISPR-RNP与酸混合并与培养细胞进行化.
• 有修复模板的腺相关病毒 (AAV) 可以用于精确的内置.
• PERC应用于T细胞和HSPCs进行基因淘汰,内置和基因编辑.

主要成果:

• 在使用Cas9或Cas12a的初级T细胞和HSPC中,PERC实现了高效的基因编辑 (超过90%).
• 该方法证明了基因淘汰和精确的转基因淘汰的有效性.
• PERC对细胞表型和活力的影响最小,允许多次分娩.
• 这种方法只需要随时可用的试剂,不需要专门的硬件.

结论:

• PERC是一种简单的,无需硬件的方法,用于在人类初级细胞中高效地进行CRISPR基因组编辑.
• 它的温和性质和高效率使其适用于研究和临床应用.
• PERC简化了在各种细胞类型中采用先进的基因组工程技术.