改进的低侵入性mRNA电穿孔方法进入未成熟的小鼠卵细胞可视化发育期间的蛋白质动态†
Yuhkoh Satouh1, Emiko Suzuki1, Keisuke Sasaki2
1Laboratory of Molecular Traffic, Institute for Molecular and Cellular Regulation, Gunma University, Maebashi, Gunma, Japan.
Biology of reproduction
|July 29, 2024
概括
我们开发了一种新的电穿孔方法,用于将mRNA引入小鼠卵细胞,改善卵细胞质量评估和胚胎选择. 这种技术增强了成熟期间染色体完整性的研究.
科学领域:
- 生殖生物学 生殖生物学
- 发展生物学 发展生物学
- 细胞生物学 细胞生物学
背景情况:
- 卵细胞质量对于成功繁殖至关重要.
- 介质 I 过程中的染色体分离错误是卵细胞质量下降的主要原因.
- 目前用于将mRNA引入卵细胞的方法是侵入性的,可能会损害发育.
研究的目的:
- 建立一种低侵入性方法,用于将mRNA引入预排卵性小鼠卵子细胞.
- 克服现有方法 (如微注射) 的技术局限性.
- 为了使卵细胞染色体动态的可视化,并评估卵细胞质量.
主要方法:
- 开发了一种低侵入性电穿孔 (EP) 方法,用于将mRNA输送到生殖囊泡 (GV) 阶段的小鼠卵细胞中.
- 优化了EP阻抗,以实现高效的mRNA引入.
- 引入了编码增强绿色光蛋白 (EGFP) 和基因素H2B-EGFP的mRNA.
主要成果:
- 在高存活率 (95.0%) 的GV卵细胞中实现了有效的mRNA引入.
- 基斯H2B-EGFPmRNA成功标记了卵细胞,但没有影响胚胎细胞发育率.
- 证明了可视化染色体动态和评估卵细胞成熟的可行性.
结论:
- 已建立的EP方法是将mRNA输入小鼠卵细胞的可行和高效技术.
- 这种方法促进了染色体完整性研究和卵细胞质量确定.
- 它为改善植入前胚胎选择和了解哺乳动物卵细胞发育提供了潜力.
