量化LAGA突变小鼠IgG2a单克隆抗体与快速素消化启用免疫亲和力LC/MS/MS测定
Linlin Dong1, Susan Chen1, Konstantin Piatkov1
1Department of Drug Metabolism, Pharmacokinetics & Modeling, Takeda Development Center Americas, Inc., Cambridge, MA, USA.
mAbs
|July 30, 2024
概括
一种新的素消化方法使得在小鼠血中敏感量化LAGA突变抗体. 这种生物分析方法克服了传统方法的局限性,支持生物治疗药物的药理动力学研究.
科学领域:
- 生物分析化学 生物分析化学
- 药理动力学 药理动力学
- 蛋白质消化 消化蛋白质
背景情况:
- 开发用于突变单克隆抗体的生物分析方法,由于试剂的特异性和的识别,提出了挑战.
- 与LAGA突变小鼠IgG2a (mIgG2a) 的联结试验和质谱面临限制.
研究的目的:
- 开发一种敏感和特定的生物分析方法,用于测量LAGA突变mIgG2a在小鼠血中的暴露.
- 为了克服试剂可用性和用于定量分析的标识方面的挑战.
主要方法:
- 研究了pepsin,一种阿斯巴拉丁蛋白酶,作为消化突变mIgG2a的替代品.
- 在pH≤2和37°C时建立了一个快速一小时的素消化协议.
- 开发了一种免疫亲和液体色谱-并联质谱 (LC/MS/MS) 试验.
主要成果:
- 素消化在LAGA突变部位附近实现了强大的C端裂变.
- 在LC/MS/MS测试中,量化极限为20 ng/mL,精度和准确度令人满意.
- 成功支持小鼠药理动力学 (PK) 样本分析.
结论:
- 基于素消化的LC/MS/MS方法为量化突变抗体提供了一种敏感和特定的方法.
- 这种方法消除了对LAGA突变的昂贵,特定免疫捕获试剂的需求.
- 这种方法广泛适用于开发基于LAGA突变的生物疗法.
