使用BANC-seqq量化基因组范围的转录因子对染色质的结合亲和关系
Roelof A Wester1, Hannah K Neikes1, Rik G H Lindeboom2
1Department of Molecular Biology, Faculty of Science, Oncode Institute, Radboud University, Radboud Institute for Molecular Life Sciences (RIMLS), Nijmegen, the Netherlands.
我们开发了BANC-seq,这是一种测量原生染色质中转录因子 (TF) DNA结合亲和力的方法. 这种技术解释了DNA可访问性和染色质结构,为基因调节提供了更准确的理解.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 基因组学就是基因组学.
- 表观遗传学 在表观遗传学中,表观遗传学是指表观遗传学.
背景情况:
- 转录因子 (TFs) 通过结合特定的DNA序列来调节基因表达.
- TF-DNA结合亲和力受局部染色质结构和DNA可访问性的影响,使准确的测量变得复杂.
- 现有的方法往往无法捕获这些关键的体内因子.
研究的目的:
- 介绍BANC-seq (通过测序结合原生染色素的亲缘关系) 的详细协议.
- 为了在原生染色质条件下准确地测量TF-DNA结合亲缘关系的全基因组范围.
- 为具有基本生物信息学技能的分子生物学家提供可复制的方法.
主要方法:
- BANC-seq涉及化完整的哺乳动物核与表位标记TFs在一个度范围.
- 染色体免疫沉或核酶裂变与spike-in DNA被用来量化TF结合.
- 表面分离常数 (KdApp) 在整个基因组中被确定.
主要成果:
- 为BANC-seq提供了一个详细的,逐步的协议.
- 该方法允许在它们的原生染色体环境中确定TF-DNA结合亲缘关系.
- BANC-seq实验可以在1.5天内完成,不包括数据分析.
结论:
- BANC-seq提供了一种可靠的方法来测量TF-DNA结合亲和力,考虑到染色体的可访问性.
- 该协议可供分子生物学家使用,尽管数据分析需要生物信息学专业知识.
- 这种技术通过结合关键的基因组背景来推进对转录调节的理解.
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