一个双重的高通量质谱测定对双功能POLB聚合酶和酶活动的测定
Zachary A Gurard-Levin1, Brian McMillan2, Douglas A Whittington3
1Charles River Labs, Chicago, IL, USA.
SLAS technology
|August 2, 2024
概括
研究人员开发了一种新的高通量质谱测定方法,用于选针对聚合酶β (POLB) 的药物,聚合酶β (POLB) 是DNA修复和潜在的癌症治疗点的关键酶.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 药物发现 药物发现 药物发现
背景情况:
- 聚合酶β (POLB) 通过基因切除修复 (BER) 途径对基因组稳定性至关重要.
- 在BRCA1/2-突变癌症中,POLB的双酶和聚合酶活动对于PARP抑制剂的合成致死性至关重要,这标志着它是治疗标.
- 对于具有多个基质或多步反应的POLB等酶,传统的测定方法是有限的.
研究的目的:
- 开发首个基于高通量质谱的屏幕,用于POLB的双酶活动.
- 为了选一个庞大的小分子图书馆用于POLB调制器.
- 用直角试验验证已识别的调节器.
主要方法:
- 开发了一种多重复合,双重复合自组装单层脱离离电离 (SAMDI) 质谱测试法,以同时测量POLB的酶和聚合酶活动.
- 在优化,动力平衡的条件下,选了20万种不同的小分子库.
- 使用基于光的聚合酶链位移和SAMDI亲和力选择质谱法 (ASMS) 试验得到确认.
主要成果:
- 成功建立并实施高通量SAMDI-MS试验,用于同时测量POLB的双重活动.
- 从20万个化合物的屏幕上确定了POLB的小分子调节器.
- 通过互补的生物化学和生物物理分析验证了鉴定到的调节剂.
结论:
- 这项工作证明了高通量质谱在药物发现方面的实用性,特别是对于具有复杂活动的酶.
- 新的SAMDI-MS方法使多重查成为可能,为识别治疗剂开辟了新的途径.
- 波尔布仍然是癌症治疗的有希望的目标,这项测试有助于发现新型抑制剂.
