汉塞努拉多态甲醇代谢基因增强了Komagataella phaffiffiella中的重组蛋白质生产

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 分子生物学分子生物学
• 代谢工程是代谢工程.

背景情况:

• 在Komagataella phaffi (K. phaffi) 中的重组蛋白质生产对于各种应用至关重要.
• 优化中央碳代谢,特别是甲醇利用途径 (MUT),增强细胞资源用于蛋白质合成.
• 在MUT内部的甲醇异样化途径是甲排毒和能量生成 (NADH) 的关键.

研究的目的:

• 研究增强甲醇异样化途径对K. phaffi. 的重组蛋白质生产的影响.
• 评估整合汉塞努拉多态甲脱酶 (HpFLD) 和形式脱酶 (HpFMDH) 基因的影响.
• 确定共表达HpFLD和HpFMDH对模型蛋白质表达的协同效应.

主要方法:

• 从Hansenula polymorpha中将HpFLD和HpFMDH基因分离和基因组整合到K. phaffi. 中.
• 在重组K. phaffi菌株中利用pAOX1促进剂进行基因调节.
• 通过蛋白活性测定和基因表达分析评估模型蛋白 (eGFP或EGII) 表达水平.

主要成果:

• 这两种集成的正统基因,HpFLD和HpFMDH,都对模型蛋白质的产生产生产生了积极的影响.
• 与HpFLD相比,HpFMDH显示了基因表达的更显著上调.
• 由于HpFLD和HpFMDH的同时表达,产生了协同效应,大约使模型蛋白的检测水平翻了一番.

结论:

• 通过共同表达HpFLD和HpFMDH来增强甲醇异样化途径是一种有效的策略,可以增加K. phaffi. 的重组蛋白产量.
• 这种方法为优化依赖K. phaffi. 的工业生物工艺提供了有价值的见解.
• 这些发现突出了跨物种基因转移在酵母宿主中的代谢工程的潜力.