一个循环分裂的纳米化酶报告器用于验证和选假定的内部核糖体进入部位元素
Mildred J Unti1, Lisa Doetsch1,2,3, Samie R Jaffrey4
1Department of Pharmacology, Weill Cornell Medicine, Cornell University, New York, New York 10065, USA.
RNA (New York, N.Y.)
|August 5, 2024
概括
内部核糖体进入部位 (IRES) 驱动了独立于帽子的翻译. 一种新的循环RNA试验提供了一种更可靠的方法来发现IRES活动,在之前报告的细胞IRES中发现最小的活动.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 遗传学 是一个遗传学.
- 生物化学 生物化学
背景情况:
- 内部核糖体输入点 (IRES) 是RNA元素,可以启动独立于帽子的翻译.
- 虽然IRES在病毒中很常见,但它们在哺乳动物mRNA中的存在和功能仍在争论中.
- 对于IRES发现,现有的二基斯特龙记者测定容易产生来自加密促进器或拼接站点的错误阳性.
研究的目的:
- 为选和验证IRES活动开发一种新的,更可靠的测定方法.
- 用新的测定方法重新评估以前报告的细胞IRES.
主要方法:
- 开发一种基因编码的循环RNA记者系统,使用分裂纳米化酶 (nLuc) 构造.
- 循环分裂的nLuc记者试验与传统的双电tronic记者试验的比较.
- 使用循环分裂nLuc试验对9个报告的细胞IRES候选者的选.
主要成果:
- 循环分裂的nLuc记者测试与双曲面测试相比,不太容易产生错误阳性.
- 之前报告的9个细胞IRES在使用新测试时表现出最小的IRES活性.
- 循环分割的nLuc报告员为IRES选提供了一种简化方法.
结论:
- 循环分割的nLuc报告员测试是一种强大而简单的工具,用于识别和验证IRES.
- 这些发现挑战了之前提出的几个蜂IRES的功能意义.
- 这种新方法提高了哺乳动物系统中IRES发现的准确性.
