血管内皮生长因子受体2的主要编辑减弱了血管生成In Vitro

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 细胞生物学 细胞生物学
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 血管内皮生长因子受体 (VEGFR) - 2对于血管生成至关重要,这是一个涉及各种人类疾病的过程.
• 向VEGFR2为异常血管生成的疾病提供了潜在的治疗策略.

研究的目的:

• 开发和评估一种新的高级原始编辑 (PE) 系统,PE6h,用于精确的基因编辑.
• 研究PE6h在产生主导阴性VEGFR2 (DN-VEGFR2) 的疗效及其对人类视网膜微血管内皮细胞 (HREC) 血管生成的影响.

主要方法:

• 开发一种基于双晶病毒载体的PE6h系统,包括CRISPR相关蛋白9 (H840A) 尼克酶,逆转录酶和增强的PE导向RNA.
• 利用PE6h在HREC的VEGFR2基因中引入了特定的编辑 (c.18315T>A),导致DN-VEGFR2的产生.
• 评估了DN-VEGFR2表达对VEGF诱导的信号通路 (VEGFR2,Akt,ERK1/2酸化) 和内皮细胞管形成的功能影响 *in vitro*.

主要成果:

• 在HREC中,PE6h成功编辑了VEGFR2,产生了过早的停止编码子,并在很大比例的细胞中产生DN-VEGFR2 (787 aa) (50.8%编辑,787 aa蛋白).
• DN-VEGFR2表达有效阻碍了VEGF诱导的VEGFR2,Akt和细胞外信号调节激酶-1/2.2.的酸化.
• 通过DN-VEGFR2抑制这些信号通路,导致内皮细胞管形成的显著减少 *in vitro*.

结论:

• 开发的PE6h系统在基因编辑方面表现出高效率和精度,使得能够生成功能性DN变体.
• DN-VEGFR2有效地抑制了驱动血管生成的关键信号通路.
• 这些发现突出了PE6h系统在抑制血管生成的治疗潜力,在疾病中它起着病理作用.