超高分辨率的蛋白质成像使用双功能的照明Aptamers

科学领域:

• 分子和细胞生物学分子和细胞生物学
• 生物物理学的生物物理.
• 显微镜的使用方法

背景情况:

• 单分子局部化显微镜 (SMLM) 需要有效的蛋白质标记方法,使用小标签和合适的光物理特性来可视化生物分子组织和相互作用.
• 光照明光吸光体 (FLAP) 为SMLM提供了潜力,RhoBAST由于其亮度,光稳定性,性和快速交换动力学而显示出希望.

研究的目的:

• 扩大RhoBAST的实用性,一个光照明的阿普坦,用于蛋白质成像,通过将其与蛋白质结合的阿普坦结合.
• 通过SMLM技术,证明这些双功能体对高分辨率和超分辨率的蛋白质成像,包括GFP标记蛋白质的有效性.

主要方法:

• 将RhoBAST与各种蛋白质结合性体融合,以创建用于蛋白质向的双功能体.
• 应用RhoBAST-PAINT,一种SMLM技术,利用化染料SpyRho,用于哺乳动物细胞系和初级神经元的超高分辨率成像.
• 与基于抗体的标准免疫光协议进行对比,对双功能阿巴特马的性能进行比较.

主要成果:

• 使用各种蛋白质结合型体和FLAP用于蛋白质成像的双功能体的多功能性.
• 通过将RhoBAST与GFP结合的阿普坦酶AP3融合,实现了GFP标记蛋白的高分辨率和超高分辨率成像.
• 与抗体相比,双功能体表现出更高的性能,是7倍小,并表现出增强的漂白电阻.

结论:

• 开发的双功能体有效地通过SMLM实现超分辨率蛋白质成像,扩大了RhoBAST的应用.
• 这种方法为基于抗体的方法提供了强大的替代方案,为较小的探针提供了改善的细胞成像光稳定性.