一种经过验证的UPLC-MS/MS方法,用于在外围血液单核细胞中量化免疫抑制药物,使用液体-液体提取与低温净化,无需复杂的预处理步骤

科学领域:

• 药理学 药理学是指药理学的学科.
• 移植医学 移植医学
• 分析化学 分析化学

背景情况:

• 免疫抑制药物 (ISDs) 对于预防移植后的接体排斥至关重要.
• 目前的治疗药物监测依赖于全血度,由于个体间的变化,与临床疗效的相关性很差.
• ISDs在淋巴细胞内起作用,使细胞内药物度成为治疗效果的更相关指标.

研究的目的:

• 开发和验证一种从外围血液单核细胞 (PBMC) 提取免疫抑制药物 (ISD) 的简化方法.
• 评估细胞内ISD度与全血/血度之间的关系.
• 探索测量PBMC中的ISD度用于治疗药物监测的临床实用性.

主要方法:

• 一种新的液体-液体提取与低温净化,消除了离心的需要,被用于ISD提取从PBMCs.
• 超高性能液体染色学-并联质谱学 (UPLC-MS/MS) 用于量化药物度.
• 方法验证包括确定循环氨酸A,塔克罗利,西罗利和酸的下限量化值 (LLOQ) 和变化系数 (CV).

主要成果:

• 开发的方法表现出高灵敏度,LLOQ低至0.2 ng/mL,某些ISD和CVs低于12.4%.
• 为所有测试的ISD建立了线性校准曲线,具有高的确定系数 (r2 > 0.9956).
• 对157个临床样本的分析显示,PBMC结合和血液/血ISD度之间存在强烈的关联,但在一小部分患者中发现了显著的差异.

结论:

• 开发的UPLC-MS/MS方法允许在PBMC中快速准确地量化ISD,使用小量的血液.
• 该方法适用于大规模临床样本分析和治疗药物监测.
• 在PBMC中测量ISD度有望为更精确的患者管理和移植中改善临床结果提供希望.