基于CRISPR/Cas13a的猪三角体冠状病毒快速检测方法

科学领域:

• 兽医病毒学 兽医病毒学
• 分子诊断学 分子诊断
• 动物健康 动物健康

背景情况:

• 猪三角型冠状病毒 (PDCoV) 在养猪场造成重大经济损失,原因是小猪的急性腹和吐.
• PDCoV的临床症状与其他猪肠道病毒相似,因此精确的检测对于疾病管理至关重要.
• 目前用于PDCoV的qPCR检测方法耗时,需要专门的设备,并且许多农场无法轻松获得.

研究的目的:

• 开发一种快速,方便和敏感的猪三角型冠状病毒 (PDCoV) 检测方法.
• 将复合酶聚合酶同热放大 (RPA) 与CRISPR/Cas13a技术结合起来用于PDCoV检测.

主要方法:

• 为PDCoV检测设计了特定的RPA原料和crRNA.
• 使用RPA扩大了目标核酸,并通过光CRISPR/Cas13a检测到它们.
• 评估了RPA-CRISPR/Cas13a测定对qPCR的敏感性和特异性.

主要成果:

• RPA-CRISPR/Cas13a试验在90分钟内提供了结果.
• 实现了PDCoV.的最小检测极限为5.7 × 10^1副本/μL.
• 证明高特异性,没有与其他常见的猪肠道病毒观察到交叉反应.

结论:

• 开发的RPA-CRISPR/Cas13a方法是PDCoV.的高度敏感,特异性和快速诊断工具.
• 这种测试为传统方法提供了一种方便的替代方案,促进了对猪群的PDCoV及时监测和控制.