使用滴滴数字PCR在细胞治疗产品中检测残留的多能干细胞:一项国际多站点评估研究

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 再生医学是一种再生医学.
• 分子诊断学 分子诊断学

背景情况:

• 在PSC衍生细胞疗法产品 (CTPs) 中的残留不分化多能干细胞 (PSCs) 由于瘤形成风险而造成严重的安全问题.
• 确保CTP的安全性和有效性需要可靠的方法来检测和量化残留PSC.

研究的目的:

• 评估滴滴数字PCR (ddPCR) 试验,用于检测PSC衍生的CTP中的残留未分化PSC.
• 在多个实验室中评估测试的性能,包括精度,灵敏度和特异性.

主要方法:

• 一项国际性的多学科研究使用了一步逆转录ddPCR (RT-ddPCR) 试验进行.
• 诱导多能干细胞 (iPSCs) 被入iPSC衍生的心肌细胞 (CMs),以模拟残留iPSCs的不同度.
• 测量了iPSC特定标记物的mRNA水平 (ESRG,LINC00678,LIN28A),以评估测定性能.

主要成果:

• 该RT-ddPCR试验在检测iPSC衍生CM中的iPSC杂质方面表现出高灵敏度和稳定性.
• 实验室间的差异主要归因于细胞增程序,而不是RT-ddPCR测定本身.
• 该测试显示了参与设施内部和参与设施之间一致的性能.

结论:

• RT-ddPCR测定是一种敏感且可靠的方法,用于检测CTP中的残留不分化PSC.
• 这种试验可以广泛应用于PSC衍生的CTPs的瘤性评估,并选择适当的标记基因.
• 细胞增程序的标准化对于最大限度地减少实验室间的变化至关重要.