一个终点多重RT-PCR用于SARS-CoV-2,检测流感A和B,包括同时RNAse P放大:一个及时的工具,更容易获得差异诊断
Thaísa Regina Rocha Lopes1,2, José Valter Joaquim Silva Júnior2,3,4,5, Priscila de Arruda Trindade6
1Programa de Pós-graduação em Medicina Veterinária, Universidade Federal de Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brazil.
Journal of medical microbiology
|August 14, 2024
概括
一种新的终点多重RT-PCR测定检测严重急性呼吸综合征相关的冠状病毒2 (SARS-CoV-2),流感A (IAV) 和流感B (IBV) 病毒. 这种可访问的诊断工具扩大了有限资源的实验室的差异诊断能力.
科学领域:
- 分子诊断学 分子诊断学
- 病毒学 病毒学
- 公共卫生 公共卫生
背景情况:
- 目前对SARS-CoV-2,IAV和IBV的多重分子分析主要依赖于实时PCR,这限制了许多实验室的可访问性.
- 需要易于使用和具有成本效益的诊断工具来对呼吸道病毒感染进行差异诊断.
研究的目的:
- 开发和验证一个终点多重RT-PCR试验,用于同时检测SARS-CoV-2,IAV和IBV.
- 提供一种替代的诊断策略,扩大对差异诊断的访问,特别是对资源有限的实验室.
主要方法:
- 设计了一种针对SARS-CoV-2,IAV,IBV和内源RNAase P控制的终点多重RT-PCR试验.
- 优化了多重测试的反应混合和循环条件.
- 使用定位病毒和阳性样本稀释,确定检测极限 (LoD),并评估临床样本的诊断性能.
主要成果:
- 该试验成功地区分了IAV (146bp),SARS-CoV-2 (113bp),IBV (103bp) 和RNAse P (65bp) 的AMPLICONs在阿加罗斯凝上.
- 达到了SARS-CoV-2的0.02 TCID50/ml的负载值,IAV的0.07 TCID50/ml,IBV的10^-3的负载值.
- 证明了高灵敏度,正确识别所有SARS-CoV-2 (n=70),IAV (n=53) 和IBV (n=12) 阳性样本,并在负样本 (n=40) 中放大RNAase P.
结论:
- 开发的终点多重RT-PCR试验是一种可行的和可访问的工具,用于同时检测SARS-CoV-2,IAV和IBV.
- 这种测试在资源有限的环境中为差异诊断提供了有价值的替代方案.
- 该试验有助于扩大关键呼吸道病毒病原体的诊断能力.
