通过疏水性相互作用染色学对补充域区域的氨酸氧化进行深入的表征

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分析化学 分析化学
• 免疫学 免疫学 免疫学

背景情况:

• 在单克隆抗体 (mAbs) 互补性决定区域 (CDRs) 中的氧化是影响治疗疗效和安全的关键质量属性.
• 鉴定CDR氧化变体的特征对于复合mAb的开发和质量控制至关重要.

研究的目的:

• 开发和验证一种强大的疏水相互作用色谱 (HIC) 方法,用于量化mAb-A.中的CDR氧化变异.
• 描述CDR氧化对mAb-A生物功能的影响,特别是抗原结合和PD-1/PD-L1阻断活性.

主要方法:

• 使用Proteomix Butyl-NP5列的水相互作用染色体 (HIC) 方法的开发.
• CDR氧化变体的量化和表征,包括氧化物种的分化和丰富.
• 对稳定性研究和相似性评估的HIC方法的验证.

主要成果:

• 通过HIC方法,成功地分离和量化了CDR氧化变异,由于水性降低,这些变异较早解离.
• 在CDR中的105位 (Met105) 的甲因被确定为氧化的主要部位.
• Met105的氧化没有影响抗原结合能力,但显著降低了PD-1/PD-L1阻断活性.

结论:

• 开发的HIC方法是一种可靠的工具,用于量化mAbs.中的CDR氧化.
• 在mAb-A的CDR中,Met105的氧化通过降低PD-1/PD-L1阻塞活性,影响其治疗功能.
• 该方法支持mAb质量控制,稳定性评估和相似性测试.