开发和优化稀释全血ELISpot试验,以测试免疫功能
Ricardo F Ungaro1, Julie Xu2, Tamara A Kucaba2
1Sepsis and Critical Illness Research Center and Department of Surgery, University of Florida College of Medicine, Gainesville, FL, United States of America.
Journal of immunological methods
|August 15, 2024
概括
一种新的稀释全血 (DWB) ELISpot试验有效地测量了败血症患者的免疫细胞功能. 这种方法简化了样本处理,有助于识别免疫失调并指导败血症的治疗开发.
科学领域:
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 临床医学 临床医学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 败血症是全球主要的健康问题,免疫调节治疗有限.
- 在败血症中准确评估免疫状态对于患者分层和治疗策略至关重要.
- 传统的ELISpot测试需要对外围血液单核细胞 (PBMC) 进行隔离,增加了复杂性和时间.
研究的目的:
- 开发和验证一种稀释全血 (DWB) ELISpot试验,用于败血症研究.
- 评估使用DWB ELISpot在败血症患者的免疫内型鉴定中的可行性.
- 为了优化DWB ELISpot参数用于ex vivo细胞因子生产分析.
主要方法:
- 从健康的捐献者和败血症患者收集肝素化全血.
- 测试了各种血液稀释,兴奋剂度,储存条件 (在室温下长达24小时),以及刺激持续时间 (短至4小时).
- 使用ELISpot测量了ex vivo干扰素- (IFNγ) 和瘤亡因子-α (TNFα) 的产生.
主要成果:
- 在全血稀释的动态范围内表现出强大的ex vivo细胞因子反应.
- 证实了广泛的兴奋剂度可以有效地使用.
- 表明全血可以在室温下储存长达24小时,而不会显著损失细胞功能.
- 确定4小时的刺激期足以产生大量的细胞因子.
结论:
- DWB ELISpot测定是一种可行且经过验证的方法,用于测量败血症中的功能性免疫反应.
- 这种优化的测定方法简化了样品处理,并减少了与传统的基于PBMC的ELISpot相比的处理时间.
- 该DWB ELISpot测定可以告知临床医生关于免疫失调在败血症和帮助开发免疫调节疗法.
