开发,验证和应用LC-MS/MS方法量化人体血中微量营养素queuine和queuosine的自由形式,使用代用矩阵方法

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 营养科学 营养科学
• 人体生理学 人体生理学

背景情况:

• 细菌合成的核酸Queuosine (Q) 和其基Queuine (q) 是人类所挽救的必不可少的微量营养素.
• 细胞中的Q-tRNA枯竭导致蛋白质折叠不当,内质网膜应激,神经元功能受损,影响学习和记忆.

研究的目的:

• 开发和验证一种敏感的方法来量化人类血液中的自由queuine (q) 和queuosine (Q).
• 建立一个可靠的工具来研究q和Q的生理和病理作用.

主要方法:

• 评估了固体相吸附剂以获得最佳的q/Q提取,确定了酸 (Bond Elut PBA) 弹是最有效的.
• 开发并验证了一种液体染色学-并联质谱法 (LC-MS/MS) 方法,使用PBS与4%的BSA作为替代矩阵.
• 在0.0003-1μM的度范围内验证了该方法的线性,量化极限,准确性和精度.

主要成果:

• 甲酸弹表现出高提取回收为q (82%) 和Q (71%).
• LC-MS/MS方法显示出极好的线性 (r2 ≥0.997),量化极限为0.0003μM,准确度和精度可接受.
• 在健康的志愿者 (n=44) 中,男性和女性 (p=0.50) 之间没有观察到q水平的显著差异.
• 在人体血样本中没有检测到queuosine (Q).

结论:

• 现在可以使用经过验证的,敏感的LC-MS/MS方法来量化人类血液中的q和Q.
• 这些发现支持q/Q在营养,生理和病理背景下作为生物标志物的潜力.
• 进一步的研究可以利用这种方法来探索q和Q水平对健康的影响.