在Saccharomyces cerevisiae中使用通用捐赠者模板和多重化CRISPR-CAS9进行无标记物基因组编辑

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 酵母遗传学 酵母遗传学
• 基因组工程是基因组工程.

背景情况:

• 传统的酵母基因组编辑依赖于基于标记物的同类重组,限制了多重编辑.
• 克里斯普尔-Cas9提供无标记器编辑,但需要对每个目标进行广泛的试剂优化.
• 开发高效,经济,多功能的酵母基因组编辑工具对于生物研究至关重要.

研究的目的:

• 开发一种高效和经济的无标记方法,用于编辑Saccharomyces cerevisiae基因组.
• 为了使同时或顺序的基因修饰,而不需要可选择的标记.
• 简化用于生物化学和细胞生物学研究的酵母菌株的生成.

主要方法:

• 设计了两个通用捐赠者模板来修复常见的可选择标记.
• 开发了一种新的指导RNA-Cas9系统,针对Ashbya gossypii中的促进器区域.
• 验证了指导RNA-Cas9系统的多重复合能力,用于多次编辑.
• 证明了PRC1,PEP4和PRB1真空蛋白酶的无标记移除.

主要成果:

• 在酵母中实现了高效,无标记的基因修饰.
• 新型指导RNA-Cas9系统成功地同时准并修复了多个可选择标记.
• 显著提高了产生单个或多个无标记剂酵母突变的成本效益和效率.
• 成功生成了没有标记物的酵母菌株,其中存在被删除的真空蛋白酶基因 (PRC1,PEP4,PRB1).

结论:

• 综合方法为无标记酵母基因组编辑提供了强大而经济的解决方案.
• 这种方法有助于生成复杂的酵母基因型,用于各种研究应用.
• 开发的工具显著提高了Saccharomyces cerevisiae中的基因操纵的容易性和速度.